ⅠNácido ucleicoiintrodución
O ácido nucleico divídese en ácido desoxirribonucleico (ADN) e ácido ribonucleico (ARN), entre os que o ARN divídese en ARN ribosómico (ARNr), ARN mensaxeiro (ARNm) e ARN de transferencia (ARNt) segundo as súas diferentes funcións.O ADN concéntrase principalmente no núcleo, as mitocondrias e o cloroformo, mentres que o ARN distribúese principalmente no citoplasma.Como base material da expresión xénica, a extracción de ácidos nucleicos xoga un papel extremadamente importante na investigación en bioloxía molecular e no diagnóstico molecular clínico.A concentración e pureza da extracción de ácidos nucleicos afectarán directamente á posterior PCR, secuenciación, construción de vectores, dixestión enzimática e outros experimentos.
Ⅱ Método de extracción e purificación de ácidos nucleicos
① Método de extracción con fenol/cloroformo
A extracción con fenol/cloroformo é un método clásico de extracción de ADN, que utiliza principalmente dous disolventes orgánicos diferentes para tratar as mostras, disolvendo ácido nucleico baseado en ADN na fase acuosa, lípidos na fase orgánica e proteínas entre as dúas fases.Este método ten as vantaxes de baixo custo, alta pureza e bo efecto.As desvantaxes son unha operación complicada e moito tempo.
② Método Trizol
O método Trizol é un método clásico para a extracción de ARN.O método Trizol divídese en fase acuosa e fase orgánica despois da centrifugación con cloroformo, na que o ARN se disolve na fase acuosa, a fase acuosa transfírese a un novo tubo EP, a precipitación obtense despois de engadir isopropanol e, a continuación, a purificación de etanol.Este método é adecuado para a extracción de ARN de tecidos animais, células e bacterias.
③ Método de purificación de columna centrífuga
O método de purificación da columna de centrífuga pode adsorber o ADN específicamente a través de materiais especiais de adsorción de matriz de silicio, mentres que o ARN e as proteínas poden pasar suavemente e, a continuación, usa PH alto baixo para combinar ácido nucleico, elución de alto valor PH de sal baixa para separar e purificar ácido nucleico.As vantaxes son a alta concentración de purificación, alta estabilidade, sen necesidade de disolvente orgánico e baixo custo.A desvantaxe é que hai que centrifugar paso a paso, máis pasos de operación.
④ Método de contas magnéticas
O método de perlas magnéticas consiste en dividir a mostra de tecido celular a través do lisado, liberar o ácido nucleico na mostra e, a continuación, as moléculas de ácido nucleico son adsorbidas especificamente na superficie da perla magnética, mentres que as impurezas como proteínas e azucres quedan no interior. o líquido.A través dos pasos da división do tecido celular, a unión de perlas magnéticas con ácido nucleico, o lavado de ácidos nucleicos, a elución de ácidos nucleicos, etc., finalmente obtense ácido nucleico puro.As vantaxes son unha operación sinxela e un uso curto, sen necesidade de centrifugación por pasos.Ten requisitos técnicos baixos e pode realizar operacións automáticas e masivas.A combinación específica de perlas magnéticas e ácido nucleico fai que o ácido nucleico extraído teña unha alta concentración e pureza.A desvantaxe é que o prezo actual do mercado é relativamente caro.
⑤ Outros métodos
Ademais dos catro métodos anteriores, hai rachaduras en ebulición, método de sal concentrado, método de deterxente aniónico, método ultrasónico e método enzimático, etc.
Ⅲ Tipo de extracción de ácidos nucleicos
Foregene ten a plataforma de PCR directa líder a nivel mundial, plataforma de illamento de ARN de dobre columna (só ADN + só ARN).Os principais produtos inclúen kits de illamento de ADN/ARN, PCR e reactivos de PCR directa serie de reactivos de laboratorio molecular.
① Extracción total de ARN
As mostras de extracción de ARN total inclúen sangue, células, tecidos animais, plantas, virus, etc. Pódense obter unha pureza elevada e unha alta concentración de ARN total mediante a extracción de ARN total, que se pode usar en RT-PCR, análise de chips, tradución in vitro, etc. clonación molecular, Dot Blot e outros experimentos.
Relacionado con xenes anterioresKits de illamento de ARN
Kit de illamento de ARN total animal--Extrae rápida e eficientemente ARN total de alta pureza e alta calidade de varios tecidos animais.
Kit de illamento de ARN total celular--Pódese obter ARN total altamente purificado e de alta calidade a partir de varias células cultivadas en 11 minutos.
Kit de illamento de ARN total da planta--Extrae rapidamente ARN total de alta calidade de mostras de plantas con baixo contido de polisacáridos e polifenois.
Kit de illamento de ARN viral--Illar e purificar rapidamente o ARN viral de mostras como plasma, soro, fluídos corporais libres de células e sobrenadantes de cultivos celulares.
② Extracción de ADN xenómico
As mostras de extracción de ADN xenómico inclúen solo, feces, sangue, células, tecidos animais, plantas, virus, etc. A extracción de ADN xenómico pódese usar na dixestión enzimática, construción de bibliotecas de ADN, PCR, preparación de anticorpos, análise de hibridación Western blot, chip xenético, alta -Secuenciación de rendemento e outros experimentos.
Relacionado con xenes anterioresKits de illamento de ADN
Kit de illamento de ADN de tecido animal--Extracción e purificación rápidas de ADN xenómico de múltiples fontes, como tecidos animais, células, etc.
Blood DNA Midi Kit (1-5 ml)--Purifique rapidamente o ADN xenómico de alta calidade do sangue anticoagulado (1-5 ml).
Kit de illamento de ADN de hisopo bucal/tarxeta FTA--Purifique rapidamente o ADN xenómico de alta calidade a partir de mostras de cotonete bucal/tarxeta FTA.
Kit de illamento de ADN vexetal- Purifica e obtén rapidamente ADN xenómico de alta calidade a partir de mostras de plantas (incluíndo mostras de polisacáridos e polifenois)
③ Extracción de plásmidos
O plásmido é unha especie de ADN de pequenas moléculas circulares nas células, que é un portador común para a recombinación do ADN.O método de extracción do plásmido consiste en eliminar o ARN, separar o plásmido do ADN xenómico bacteriano e eliminar proteínas e outras impurezas para obter un plásmido relativamente puro.
Mini kit de plasmidos xerais--Purifique rapidamente o ADN plasmídico de alta calidade de bacterias transformadas para experimentos de bioloxía molecular rutineiros como a transformación e a dixestión enzimática.
④ Outros tipos de extracción, extracción de miRNA, etc.
Kit de illamento de miRNA animal- Extraer de forma rápida e eficiente pequenos fragmentos de ARN de 20-200nt miARN, siRNA, snRNA de varios tecidos e células animais.
Ⅳ Requisitos para o resultado da extracción e purificación de ácidos nucleicoss
① Para garantir a integridade da estrutura primaria do ácido nucleico.
② Reducir a interferencia de proteínas, azucres, lípidos e outras macromoléculas
③ Non debe haber disolvente orgánico nin alta concentración de ións metálicos que poidan inhibir o encima nas mostras de ácido nucleico.
④ A contaminación por ARN e outros ácidos nucleicos debe eliminarse ao extraer o ADN, e viceversa.
Hora de publicación: 24-novembro-2022
